Skip navigation

Tujuan:

Untuk mengamati bentuk sel dan membedakan garam negatif dan gram positif

Dasar teori:

Pewarnaan gram merupakan pewarnaan difrensial karena dapat di gunakan untuk membedakan antara bakteri gram negatif dan gram positif. Pewarnaan ini sering di gunakan untuk identifikasi dan klasifikasi bakteri. Komposisi dinding sel bakteri gram positif berbeda dengan bakteri gram negatif sehingga hasil pewarnaan gram akan berbeda. Pewarnaan gram membutuhkan gram A ( cat kristal violet sebagai cat utama), Gram B(lugol iodin sebagai mordan) , gram C (etanol:aseton=1:1 sebagai peluntur) dan gram D ( cat safranin sebagai cat penutup). Hasil reaksi pewarnaan gram yaitu bakteri gram positif akan berwarna violet sedangkan bakteri gram negatif akan berwarna merah)

Alat dan Bahan

Ø  Gelas benda, lampu spirtus, mikroskop

Ø  Jarum ose

Ø  Akuades steril

Ø  Biakan murni: Staphylococcus aureus, bacillus subtilis, escherichia coli

Ø  Larutan gram A,B,C,D

Cara kerja:

1.    Bersihkan obyek glass dengan alkohol agar bebas lemak

2.    Buat preparat smear dari biakan secara aseptik

3.    Preparat smear tersebut di kering udarakan

4.    Lakukan fiksasi di atas nyala lampu spirtus

5.    Letakkan preparat pada rak pengecatan lalu tetsi dengan 2-3 tetes Gram A dan diamkan selama 1 menit

6.    Cuci dengan air mengalir dan tiriskan

7.    Tetesi dengan larutan mordan (gram B ) dan diamlan selama 1 menit

8.    Cuci dengan air mengalir lalu tiriskan

9.    Tetesi dengan larutan gram C dan biarkan selama 30 detik

10. Cuci dengan air mengalir dan tiriskan

11. Tetesi dengan cat penutup ( gram D) dan diamlan selama 1 menit

12. Cuci dengan air mengalir dan tiriskan

13. Preparat di keringuadarakan  atau serap dengan kertas serap

14. Amati preparat dengan mikroskop

Hasil pengamatan

Providensia( gram negatif)

Bacillus (gram positif)

Evaluasi

1.    Sebutkan perbedaan bakteri gram positif dan gram negatif!

Jawab:

Gramm positif: dinding tebal terdiri dari peptidoglikan (50-90%), asam terikhoat, tebal 12-           17 nm

Gram negatif : dinding tipis terdiri dari peptidoglikan 5-20%, lipoporisakarida 2-3 nm.

2.    Sebutkan fungsi dari gram A,B,C,D!

Jawab: gram A sebagai cat utama

Gram B untuk mengintensifkan warna

Gram C sebagai peluntur

Gram D  sebagai cat penutup/cat lawan

3.    Sebutkan faktor-faktor yang mempengaruhi hasil pengecatan gram:

Jawab:

a.    Fiksasi

Jika telalu lama maka dinding sel pecah sehingga yang harusnya gram positif akan seperti gram negatif.

b.    Smear terlalu tebal

Gram negatif akan menjadi seperti gram positif.

c.    Waktu pengecatan tidak tepat

Jika gram C terlalu lama maka gram (+) akan sperti gram (-)

d.    Konsentrasi reagen

Gram A terlalu encer=gram (+) →gram (-)

e.    Konsentrasi peluntur

Semua alkohol=terlalu lambat

Semua aseton=terlalu cepat

f.     Umur bakteri

Terlalu tua , autolisi=gram (+)→(-)

g.    Medium

Asam=gram(+)→gram (-)

Basa =gram (-)→gram (+)

h.    Nutrisi

Jika kekurangan gram (+)→gram (-)

Tinggalkan Balasan

Isikan data di bawah atau klik salah satu ikon untuk log in:

Logo WordPress.com

You are commenting using your WordPress.com account. Logout / Ubah )

Gambar Twitter

You are commenting using your Twitter account. Logout / Ubah )

Foto Facebook

You are commenting using your Facebook account. Logout / Ubah )

Foto Google+

You are commenting using your Google+ account. Logout / Ubah )

Connecting to %s

%d blogger menyukai ini: